Protein At Beads 4FF 预装柱

货号：YA2471

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产品介绍：

Protein At Beads 4FF 是用于分离和纯化单克隆抗体的亲和层析介质。Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc片段结合哺乳动物IgG。Protein At Beads 4FF的配体蛋白 Protein At是在天然蛋白A的基础上进行生物工程突变得到的一种耐碱蛋白A(Alkaline tolerate，故缩写为At)。Protein At Beads 4FF 配体脱落量低（小于10ng/mg IgG），该产品可以耐受 0.1M NaOH-0.5M NaOH 的在位清洗，更加方便客户尤其是工业客户的清洗操作。

本产品是一种中压预装柱，有1mL 和5mL 两种规格的预装柱，分别填装 1mL和5mL Protein At Beads 4FF，共有5种不同包装规格的产品。预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如AKTA 等，方便客户操作。

产品参数：

纯化流程：

1、Buffer 的准备

所用水和Buffer 在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。

结合/ 洗杂 Buffer: 0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH 7.0

洗脱 Buffer: 0.1M 甘氨酸，pH 3.0

中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5

2、样品准备

上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、 腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3、样品纯化

1. 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2. 用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。

3. 使用至少5倍柱床体积的结合 Buffer 平衡色谱柱。1ml 预装柱推荐流速为 1ml/min,5ml 预装柱推荐流速为5ml/min。

4. 利用泵或注射器上样。

注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

5. 用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。

6. 用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。

注：首次使用时，可先按照填料清洗中CIP 清洗一遍，避免脱落的配体残留。

7.SDS-PAGE 检测：将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。

4、 残留配体的去除

Protein At Beads 4FF 配体的脱落很低，小于10ng/mg抗体。但是很多产品需要完全去除，可采用阳离子交换、阴离子交换或凝胶过滤等方法去除，具体参照阳离子交换树脂、阴离子交换树脂和凝胶过滤树脂的使用。

5、 填料清洗

Protein At Beads 可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。

CIP 清洗

Protein At Beads 4FF 是一种耐碱亲和介质，可以耐受 0.1M-0.5M NaOH 溶液的清洗，成本低，效果好，具体操作：

3 倍柱体积的结合液；

至少2倍柱体的0.1–0.5 M NaOH，接触时间为10–15 minutes；

5 倍柱体积的结合液冲洗。

注：因 0.1–0.5 M NaOH 粘度大易造成压力增加，可进行反向冲洗。